共聚焦顯微鏡比寬場顯微鏡具有更多的優(yōu)勢，共聚焦顯微鏡可以對樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號干擾，為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來越多，要如何進(jìn)行選擇呢？
 

　　共聚焦顯微鏡比寬場顯微鏡具有更多的優(yōu)勢，共聚焦顯微鏡可以對樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號干擾，為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來越多，要如何進(jìn)行選擇呢？在選擇共聚焦顯微鏡時，zui基本也zui重要的考慮因素主要有兩點：您想要研究的樣本類型(如：固定的細(xì)胞還是活細(xì)胞)，以及您想要進(jìn)行的檢測類型(如：靜態(tài)還是動態(tài)細(xì)胞過程)。
 

　　固定細(xì)胞的共聚焦成像
 

　　要對固定且染色了的細(xì)胞或組織成像，我們一般選擇激光掃描共聚焦(LSCM)。這主要是因為固定的死細(xì)胞缺乏活細(xì)胞中的快速生物學(xué)事件，能更好的受益于LSCM較高的空間分辨率。LSCM成像是通過激光對樣品進(jìn)行光學(xué)層切，掃描速度(取決于掃描陣鏡速度)一般為1fps。曝光時間越長意味著光漂白的風(fēng)險越大，但對于固定的死細(xì)胞，時間并不是很關(guān)鍵，我們可以通過拍多張圖片來平均。
 

　　活細(xì)胞的共聚焦成像
 

　　成像活細(xì)胞需要額外的保護(hù)，以免不友好環(huán)境的干擾。在成像時，我們首先需要考慮的是保持細(xì)胞的活性和健康，恒溫加熱元件和灌流系統(tǒng)是的，尤其對于進(jìn)行time-lapse(時間序列)的研究來說?？刂苹罴?xì)胞生理狀態(tài)的快速生化事件是大多數(shù)人zui想要研究的，但這些事件對于傳統(tǒng)LSCM來說太快了。此外，LSCM的長時間曝光還會引發(fā)毒性光照損傷細(xì)胞。因此，對活細(xì)胞進(jìn)行成像會需要特殊的共聚焦顯微鏡。
 

　　對活細(xì)胞進(jìn)行共聚焦成像一般有兩個選擇：快速掃描的激光掃描共聚焦和轉(zhuǎn)盤共聚焦?？焖賿呙韫簿劢癸@微鏡用較快的共振掃描陣鏡(resonantscanningmirrors)取代較慢的galvanometersmirrors，能使掃描速度達(dá)到30fps；而轉(zhuǎn)盤共聚焦(SDCMs)的優(yōu)勢在于掃描速度更快(雖然不可避免的要損失空間分辨率)，其速度理論上可達(dá)到2000fps(實際上往往受到其他因素的限制)。
 

　　如果您擔(dān)心光漂白或者很弱的熒光信號，那么SDCM可能更加適合。SDCM采用兩個帶有陣列微孔的轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動來分散激發(fā)光，不同于LSCM對樣品進(jìn)行點掃描，SDCM一次采集多個點(大約100個像素點)，因而速度大大增加，并且SDCM的光漂白及光毒性更小。不過，您也可以采用快速掃描共聚焦來提高掃描速度，配合高靈敏檢測器，降低激發(fā)光能量來減少光毒性，這樣能夠保證傳統(tǒng)共聚焦的豐富功能。